分子（DNA、RNA）样品的保存
本文将介绍DNA、RNA的保存策略，顺带提及细胞的保存方法。
DNA为双螺旋结构，具有较高稳定性，但在野外样品采集的过程中仍需注意，以防降解。下面介绍以测序为目的的 植物DNA 采集与保存方法。
（一）组织的采集
通常 采集 用于测序的材料为当年生新鲜、幼嫩（近成熟）的健康组织，多以叶片为主，但当叶片难以获得时亦可采集植物的其它组织或器官（如芽、花、果实和种子等）。每份样品采集3-5g（鲜重），若为叶片可以表面积不小于50cm 2 计算（尺寸大小约等于成年人的手掌面积），每号DNA材料很好分为2份保存。可以将新鲜的植物DNA材料快速放入液氮（或带有冷藏功能的采集箱）中直至运输回实验室 [1] ，回实验室后存于液氮或改用-80℃超低温保存，无需干燥，可长期保存（2年需行检查）。
用液氮或采集箱保存的 缺点 是不利于野外作业，下面着重介绍 干燥保存 的方法 [2] 。将新鲜的植物DNA材料置于柔软且透气性较好的纸袋中进行干燥。透气的纸袋可以将植物DNA材料在干燥时与 硅胶（干燥剂） 分开，这样即便植物叶片因干燥变脆后，也不会在运输过程中被硅胶挤碎，不会与硅胶混杂，并造成样品间的交叉污染。如果没有类似的纸袋也可用塑料的自封袋替代，但植物DNA材料就需要与硅胶置于一起进行干燥。
对于易失水的植物DNA材料（如纸质叶或幼嫩叶片等），应在野外采集DNA材料并立即进行快速干燥；对于不易失水的植物遗传物质材料（如革质叶或蜡质叶等），可在采集后放置一段时间（ 在叶片失水前 ），然后再进行干燥，但很好在采集后立刻干燥；对于难于用硅胶快速干燥的遗传物质材料（如较厚或具多浆的叶片或种子等），可将这些材料碎成小片（块）后用硅胶快速干燥。
目前快速干燥植物DNA材料的很佳方式是硅胶（一种干燥剂），能够使植物材料在短时间内快速脱水，并且对DNA的损伤较小。有粉末状的白色硅胶（直径为20～30 Å）与变色硅胶（蓝色）两种类型可供选用，但混合使用效果更佳。粉末状硅胶能与组织紧密接触，加快干燥效率，变色硅胶则能显示出干燥的情况。通常变色硅胶是必要的，而粉末状硅胶可酌情使用。使用时应放入足够的硅胶（ 使硅胶覆盖全部的遗传物质材料 ）进行快速干燥。
（二）组织的保存
利用硅胶对植物组织干燥处理之中或之后，除野外采集过程，均需置于合适的环境当中。该环境的条件为温度（4-15℃）、湿度（相对湿度小于10%-30%），如果没有相应的保存条件，可在室温下保存，但一定保持在通风条件良好且干燥的环境下；植物DNA材料也可以在低温（-20℃）或超低温（-80℃）条件下保存，但需要保持DNA材料的干燥状态。尽管在这些条件下看似保险，但实际上植物DNA材料（如叶片等）很难长期保存，如在室温下保存超过2年的植物DNA材料其基因组DNA就会发生降解。因此另一种策略是保存总DNA。
（三）总DNA的保存
利用常规的方法（CTAB法、SDS法、试剂盒法等）提取材料总DNA，保存前需检查DNA的完整性、纯度、浓度和含量等。
植物总DNA的保存很好以 干粉状态 保存，如果总DNA以 溶液 形式保存，则用1 × TE缓冲液稀释，且TE的缓冲液的pH值为8.0-8.5之间。植物总DNA低温保存很好在-80℃以下或液氮保存，无条件的也可在-20℃保存；总DNA应避免经常冻融;同时建议每份样品保存3-5个样本。总DNA提取后保存的时限通常较组织要长（＞两年），但若长期保存，每隔两年应抽测，对不符合使用要求的DNA进行更新。
RNA为单链分子，稳定性差，极易降解，降解的主要原因是内源性核酸酶（ribonuclease，RNAase）的作用，它在活体内的存在时间也不长。然而外源性RNA酶也不容忽略，头发、灰尘、体液、塑料等均有RNA酶的存在。因此RNA的保存需极其谨慎，提取时应该戴帽子、口罩、橡胶无菌手套，并在洁净、灰尘少的地方提取。从组织材料的采集开始，经运输与储存，包括实验的全过程，涉及到RNA的均需将其处于 液氮 中 [3] ，该温度下细胞生理生化过程近乎停止，方能较长时间保存。这意味着不仅组织材料需保存于液氮中，实验操作也需保证液氮充足供应。将样品保存于-80℃等均无法制止RNA的局部或完全降解。
细胞是DNA、RNA的载体，细胞也构成了组织。当涉及专属的细胞学实验时，便需要特殊的方法对其保存，这往往是细胞工程的基础。例如做单细胞克隆，要求细胞具有活力。又如基于某些目的使用流式细胞术分析细胞，此时要确保细胞能够相互分离，通常要求细胞具有活性，糖在细胞内的累积会导致分析不准。液氮的低温环境（-196℃）是目前很佳的冷冻保存温度，复苏后细胞的结构和功能完好。如果冷冻过程得当，一般生物样品在-196℃下可保存十年以上。应用-80℃保存细胞，短期内对细胞的活性无明显影响，但随着冻存时间延长，细胞存活率明显降低。
不同层次的样品，需根据样品性质、实验目的、保存条件，综合分析，选择很适合的方法。目的样品是分子水平，就需从分子角度考虑组织的保存；细胞水平，则是从细胞角度考虑。不同层次对细胞的活性要求也不同。
[1] 王珍,方宣钧.植物DNA分离[J].分子植物育种,2003(02):281-288.
[2] 高连明,刘杰,蔡杰,等.关于植物DNA条形码研究技术规范[J].植物分类与资源学报,2012,34(06):592-606.
[3] 张荻.百子莲花芽分化及开花机理研究[D].东北林业大学, 2011.
[1] RNA降解原理 . Cas9X海星生物 - 搜狐.
[2] 【科学普及】“很好细胞”的保存——浅谈细胞冻存 . 政务：细胞世界 - 澎湃.
请教植物DNA提取
专用简单方法：1、将小指甲大小叶片用液氮快速磨碎。2、快速加入专用DNA提取液，用移液枪吸打几下后将液体吸入1.5MLEP管内。3、离心12000R，10min。4、将上清液吸入1.5MLEP管内，加入异丙醇，上下颠倒。5、离心12000R，10min。6、倒掉上清液，干燥DNA。7、将DNA溶于60uLDDH2O -20℃保存。
优点：快速、方便、无毒。
博凌科为的快速植物DNA提取扩增套装容易储存吗，有什么限制吗？
这款产品还是比较容易储存的。
产品储存：
Buffer A 和Buffer B室温保存12个月，注意温度低时Buffer A或者Buffer B可能有沉淀析出，应该在37℃水浴重新溶解澄清后使用。其它成分－20 ℃保存。
产品介绍:
本试剂盒包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试剂，适用于从植物组织一步法提取基因组DNA并用于PCR扩增。整个提取过程无需蛋白酶K消化和有机溶剂抽提，无需无水乙醇沉淀，简便、快捷，而且质量稳定可靠。本试剂盒提供的2x PCR Reagent 是一种扩增兼容性很强的PCR 试剂，无需彻底去除蛋白等杂质，便能进行高效特异扩增，特别适合于高通量的筛选。
CTAB法提植物组DNA时，65℃水浴后为什么室温放置30min
植物基因组提取时为什么要65度水浴保温
植物DNA提取方法
方法一：
取两片幼嫩新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入适量液氮，迅速研磨成粉末状，随后加入3ml预热的2%CTAB抽提缓冲液和50ul抗氧化剂2-巯基乙醇，继续研磨成略有流动性的糊状或粥状，转入1.5ml的离心管中，于65℃水浴锅中保温约60min。
2.待混合物冷却至室温后加入等600ul的CI（氯仿：异戊醇=24：1）溶液混匀，轻轻颠倒离心管几次使管内混合物成乳浊液，常温下10000rpm离心10min,取上清液转入另一干净的离心管中。
3.重复步骤（2）一次。
4.取步骤（3）上清液加入2.5倍体积无水乙醇，仔细混匀，-20冰箱30min以上，沉淀DNA 4℃，12000rpm离心10min。
5.弃去上层有机溶剂，加500ul75%乙醇洗涤沉淀，4℃下8000rpm离心5min,弃去上清，洗涤沉淀3次。
6.倒置或者37度培养箱烘干。
7.加50ulTE缓冲液溶解DNA，于-20℃冷藏备用。
方法二：
在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。
2. 植物5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6. 在1.5mleppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。
7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟,上清液倒入干净的5ml离心管。
9. 加入5μlRNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。
11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。
12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。
13. 取2μlDNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
植物DNA提取后怎么保存
短时间的话，将提取到的DNA溶于无菌水或TE缓冲液，放于4℃冰箱保存即可。
CTAB法提取植物DNA
（1）可以的，液氮冷冻更容易破碎细胞壁释放DNA，但是不冷冻也没关系的，提取的DNA量即使少点也足够满足试验要求。
（2）-20度足够保存，用一年以上都没问题，超低温保存时间当然更长，但是切忌反复冻融，建议提取后直接分装，以后使用每次取一管
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